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假病毒(pseudovirus)是病毒衣壳蛋白或者包膜蛋白包裹携带有报告基因的异源核酸形成的类似于真病毒的具有感染性的病毒颗粒,由于被包裹的核酸不具有复制形成病毒的全部核酸序列的能力,所以假病毒只有一轮的感染力,操作比较安全。
假病毒主要通过多质粒共转染HEK293T或293FT细胞,在细胞内自行复制、表达组装形成,通过收集培养基上清或者裂解细胞等方法获得。
假病毒具备和真病毒一样的感染性,进入细胞的过程和真病毒一样,但其进入细胞后不具有复制产生病毒的能力,因而没有危害,可以更安全地用于中和抗体和抗病毒药物检测。对传染性强、致病性强的病毒,如SARS-CoV,Ebola病毒,狂犬病毒,H7N9等的研宄具有极大的危险性,而且数量有限,而假病毒安全性好,并可以通过转染技术大量制备,为这些危险性高的病毒研宄提供了方便。
假病毒体系有多种,主要包括以慢病毒载体构建的假病毒,以病毒蛋白自组装形成的假病毒,以及以病毒基因改造、插入报告基因所形成的假病毒。慢病毒载体是以HIV-1 为基础发展起来的,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,可提供所有转录并包 装RNA到重组假病毒所需要的全部辅助蛋白,利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞, 在细胞中进行病毒包装,包装好的病毒颗粒分泌到细胞外培养基中。
假病毒体系的特点是克服了传统方法的缺陷,使检测技术更安全、简便、快速、高通量,而且使一些本身很难培养的病毒也能采用培养的方法进行检测。
假病毒与核酸检测试剂盒:
假病毒在检测领域的应用主要为病毒核酸检测试剂盒中作为阳性对照标准品和内控标准品。最新的CFDA申报指导原则中,要求病毒核酸检测试剂盒用假病毒作为阳性标准品和内控标准品。
假病毒标准品要求:
1. 假病毒标准品具有和待检测目的病毒同样或者类似的理化性质,如均为包裹了核酸物质的蛋白颗粒。
2. 假病毒标准品携带了与待检测目的病毒相同的探针核酸片段。
3. 假病毒标准品纯度足够高,生产时需去除外源污染性核酸物质。
万物生物假病毒包装流程
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