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10% SDS-PAGE彩色(绿色)凝胶超快速配制试剂盒

优惠价 150.00
价格 ¥0.00
货号:
S0921K65
产品规格:
50T
购买数量:
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产品详情 操作说明 注意事项

产品描述

本试剂盒提供了简单而又快速的10% SDS-PAGE彩色(绿色)凝胶配制试剂,能够同时制备下层胶(即分离胶)和上层胶(也称浓缩胶、积成胶),用户只需准备制胶设备,即可快速制备蛋白凝胶。同时,试剂盒中上层胶溶液B中含有绿色染料,使得蛋白点样孔清晰呈现,实现了加样过程的可视化,极大的提高了加样效率。该绿色染料可在上层胶中稳定存在,不会随着电泳而迁移至下层胶,不会影响电泳和染色效果,电泳完成后也便于识别上层胶并切除,不影响后续Western Blot等实验。

本试剂盒可制备常规尺寸的凝胶50块,具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;

4℃避光保存,有效期12个月。


操作步骤

1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同,选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶,参照表格如下:

SDS-PAGE分离胶浓度

最佳分离范围(kDa)

(Tris-Glycine电泳缓冲液)

最佳分离范围(kDa)

SWE快速高分辨电泳缓冲液

6%

50-300

15-300

8%

30-130

10-250

10%

20-100

5-150

12%

10-60

3-100

15%

<40

<60

2. 配制10% AP溶液:称取AP(过硫酸铵)粉末0.1 g,用1 mL水完全溶解。该溶液4℃存贮1-2周有效,-20℃保存3个月有效;

3. 根据实验需求,等比例混合溶液A和B,加入适量的10% AP溶液(100倍稀释),分别配制下层胶溶液、上层胶溶液。不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积,以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板(单块)为例,推荐配制体系如下表格:

配制组别

组分

0.75 mm玻璃板

1.0 mm玻璃板

1.5 mm玻璃板

下层胶溶液

6%下层胶溶液A

2 mL

2.5 mL

4 mL

6%下层胶溶液B

2 mL

2.5 mL

4 mL

10% AP

40 μL

50 μL

80 μL

上层胶溶液

上层胶溶液A

1 mL

1 mL

1.5 mL

上层胶溶液B(绿色)

1 mL

1 mL

1.5 mL

10% AP

20 μL

20 μL

30 μL

4. 装配好凝胶制具,先加入配制好的下层胶溶液,并立即缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液(也可使用蒸馏水封住下层胶液面,待下层胶凝固充分后再加入配制好的上层胶溶液,约15-30 min),插入梳子,待其凝固(约15-30 min左右)后即可使用;

5. 配制完成的凝胶如不能当天使用,可4℃保存1-2天。

6. 推荐电泳条件:

a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液进行电泳:200-250 V,25-35 min;

b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液进行电泳:上层胶90 V,约30 min(marker进入分离胶);下层胶150-180 V,约60-90 min(可根据实际情况调整)。


注意事项

1. 上层胶溶液B长时间静置容易产生絮状沉淀,使用前请轻轻颠倒混匀。

2. 上层胶溶液B和下层胶溶液B均含有SDS,使用时请勿剧烈摇晃,避免产生气泡,从而影响凝胶灌制。

3. 预混液中存在单体丙烯酰胺,对人体有害,操作时请注意做好防护措施。

4. 为了保证样本同时进入分离胶,直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。

5. 加入AP之后尽快灌制凝胶,请勿长时间放置。

6. 胶的凝固与温度有显著的正相关性。同等条件下,温度越高,凝固速度越快。

7. 如需进一步加快凝胶速度,临配胶前可按需补充适量TEMED,同时增加0.5倍10% AP使用量。

8. 本公司同时提供其他彩色(红色、黄色、蓝色)上层胶溶液,以区别不同样本不同凝胶电泳。

9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!


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