服务热线
400-1016-218
联系方式
- 手机：400-1016-218
- Q Q：355185756
- 邮箱：355185756@qq.com
- 地址：安徽省合肥市高新区黄山路602号合肥国家大学科技园A401室
产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
PEI 40K Transfection Reagent（线性化聚乙烯亚胺转染试剂），是一种以线性化聚乙烯亚胺为主体、分子量为40000的高电荷阳离子聚合物，其本身带正电，可以有效的结合带负电的核酸，与之形成复合物，并导入到细胞中，适用于细胞的质粒DNA转染。PEI 40K（线性化聚乙烯亚胺）转染试剂细胞毒性低，转染效率高且成本低，相较于脂质体类转染试剂，性价比极高。目前已经验证线性PEI 40K转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等，转染效率高达80%~90%。本产品主要成分PEI 40K浓度为1 mg/mL。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃保存，有效期至少6个月；长期不用可-20℃保存更长时间，避免反复冻融。
组成
|
Component |
G1802-1ML |
G1802-10ML |
|
PEI 40 K Transfection Reagent |
1 mL |
10×1 mL |
|
产品说明书 |
1份 | |
操作步骤
1. 贴壁细胞转染前准备工作（6孔板为例，其他规格参考附表）：
a) 转染前一天，将细胞以合适的密度均匀种植于孔板中，以正式转染时细胞汇聚至70-85%为宜；
b) 转染前，去除原细胞培养基，用PBS清洗1-2次后，更换1.8 mL不含血清或者低血清（5%以下）的基础培养基，或Opti-MEM；不同细胞对于血清依赖性不同，根据具体细胞种类调整。
c) 将换好液的细胞放置于培养箱中，并开始配制转染复合物。
2. 悬浮细胞转染前准备工作：
a) 转染当天，将适量的细胞，离心去除培养基后，用不含血清或者低血清（5%以下）的基础培养基重悬；
b) 将准备好的悬浮细胞放置到培养箱中，并开始配制转染复合物，转染复合物和培养基之间的体积比，可以参考贴壁细胞的比值，进行适当调整。
3. 转染复合物准备：
a) 配制A液：100 μL不含血清的基础培养基与2 μg质粒DNA，吹吸混匀；
b) 配制B液：100 μL不含血清的基础培养基与6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent，吹吸混均；
c) 将B液加到A液中，轻轻吹打混均，室温孵育15 min，使其形成DNA-PEI转染复合物。
4. 转染细胞：
a) 将上一步得到的转染复合物，以画十字或者环绕的方式，滴加到之前换好液的孔板中；
b) 手持孔板在平面上画“8”字或其他的方式轻摇培养板，使其混合充分，置于37℃，5% CO2培养箱中孵育；
c) DNA-PEI转染复合物与细胞共同孵育4-6 h即有较好的转染效率，适当延长或过夜孵育，转染效率更佳。
注意事项
1. 请使用状态良好的健康细胞，复苏的细胞建议至少传代2次后再进行转染。
2. 请使用高质量、无内毒素的质粒DNA。
3. 转染时高浓度血清以及抗生素的使用，可能会影响细胞状态以及转染效率。
4. 不同的细胞耐受性、敏感性不一样，转染孵育时间长短，以及PEI/DNA使用比例，可视情况酌情调整。
5. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。
附表：不同细胞培养容器转染使用量（仅供参考）
|
培养器皿 |
生长面积 （cm2） |
接种细胞数 |
DNA量 （μg） |
PEI （μL） |
转染复合物体积 （μL） |
总体积 （mL） |
|
96孔板 |
0.3 |
(2-4)×104 |
0.1 |
0.3-0.4 |
10 |
0.1 |
|
24孔板 |
1.9 |
(1.2-2.4)×105 |
0.5-1 |
1.5-4 |
50 |
0.5 |
|
12孔板 |
3.8 |
(2.4-4.8)×105 |
1-2 |
3-8 |
100 |
1 |
|
6孔板 |
9.5 |
(6-10)×105 |
2-4 |
6-16 |
200 |
2 |
|
10 cm培养皿 |
55 |
(4-6)×106 |
12-24 |
36-96 |
1000 |
12 |
|
T75培养瓶 |
75 |
(6-10)×106 |
18-36 |
54-144 |
1000 |
15 |
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
凡合肥万物生物科技有限公司销售的产品均有严格的质量保证。如发现产品存在包装规格疑问，请于收货之日起七日内向我公司总部或当地办事处提出，并请保证该产品，以备本公司进行核对检验。如果发现有质量问题，请于收货后一月内保留产品50%以上的量，以便本公司回收产品进行质检，确认产品质量。如逾期，则视为已经对本公司产品进行验收。 声明：如发生产品索赔事宜，本公司仅在产品价格范围内酌情赔偿，恕不接受超出产品价格范围之赔偿。客户在使用过程中有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话我们随时给予解答。
合肥万物生物科技有限公司
客服热线：400-1016-218
QQ：355185756
地址：安徽省合肥市高新区黄山路602号合肥国家大学科技园A401室