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支原体检测试剂盒(化学发光法)

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货号:
FKU018
产品规格:
20T
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产品详情 操作说明 注意事项

产品信息

产品名称

产品编号

规格

支原体检测试剂盒(化学发光法)

FKU018

20T



产品简介

本支原体检测试剂盒是利用支原体中特有酶的活性设计而成,该酶可将支原体检测试剂中特有的底物分解同时将ADP转换成ATP,萤光素酶在ATP存在下催化萤光素氧化发出生物萤光,可通过化学发光仪(luminometer)进行测定,以反应待检样品是否存在支原体污染。整个检测过程操作简单,只需两个步骤,耗时约15 min。该方法灵敏度高,检测的是真正具有生物活性的支原体,所以检测结果比PCR方法更准确。



储存与运输

冰袋(wet ice)运输;-20℃保存,支原体检测试剂A需避光保存;有效期12个月。

组成

Component Number

Component

G1901-20T

G1901-1

支原体检测试剂A

1 mL

G1901-2

支原体检测试剂B

1 mL

说明书

1份



操作步骤

1. 取适量(1 mL足够)培养3-6天的细胞上清,400 g离心3 min,以去除沉淀少量漂浮细胞或碎片,取上清立即检测,或者4℃保存在一周内检测,或者-80℃保存半年内检测;

2. 将所有检测试剂和检测样品均平衡至室温,最适宜的温度为20-25℃;

3. 在96孔检测板(非透明板,建议用专用96孔白板)中加入50 μL待检测样品、阴性对照(如无菌水或PBS);

4. 加入50 μL支原体检测试剂A,轻柔混匀不要产生气泡,室温(20-25℃)避光放置5 min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测,计读数为A。(请根据仪器灵敏度适当调整相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1 s);

5. 加入50 μL的支原体检测试剂B,轻柔混匀不要产生气泡,室温(20-25℃)避光放置10 min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测,计读数为B。(注:请严格按照加入支原体检测试剂B后10 min进行检测,不应提前或延后,否则会影响结果判断);

6. 计算比值(Ratio)=读值B/读值A。

A. 如果B/A>1.1,说明细胞培养物中存在支原体污染;

B. 如果B/A<0.9,说明细胞培养物中没有支原体污染;

C. 如果B/A比值在0.9-1.1之间,建议继续培养细胞24-48 h后,再次检测确定是否存在支原体污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之间,则该细胞培养物没有支原体污染,为支原体阴性。



注意事项

1. 支原体检测试剂A中含有萤光素酶,反复冻融会逐渐使其失活,建议第一次解冻后应适当分装保存,分装容器需洁净无污染。

2. 检测时强烈建议使用白色或者黑色不透光96孔板,使用普通透明96孔板会使得相邻检测孔出现干扰。

3. 人体皮肤表面含有丰富的ATP,检测时请带好实验手套、口罩,其他耗材也应洁净、无污染,防止外源引入ATP污染。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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