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Bradford 法蛋白定量检测试剂盒

优惠价 125.00
价格 ¥0.00
货号:
S0921K44
产品规格:
250ml
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产品详情 操作说明 注意事项

产品简介

目前最常用的蛋白浓度定量检测方法有两种,即Bradford法和BCA法。Bradford法原理是基于考马斯亮蓝G250能与蛋白质快速结合。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488 nm,其与蛋白质结合后在595 nm处有最大吸收值,并且光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量检测。本方法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1 mM,二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM;但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS含量低于0.01%,Triton X-100含量低于0.05%,Tween-20,Tween-60,Tween-80等含量低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

本试剂盒操作简便快捷,灵敏度高,检测速度极快,可检测蛋白浓度范围为25-1000μg/mL。



储存与运输

整套试剂可常温运输;蛋白标准品(BSA)4℃保存,有效期12个月。配制成蛋白标准溶液后需-20℃保存,并在6个月内使用。


操作步骤

1. 配制蛋白标准贮备液:取1 mL蛋白标准配制液加入到蛋白标准品(BSA)管中,将25 mg蛋白标准品完全溶解,即得到浓度为25 mg/mL的蛋白标准贮备液。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。

2. 配制蛋白标准工作液:取适量25 mg/mL蛋白标准贮备液,用PBS或生理盐水稀释50倍,得到终浓度为0.5 mg/mL的蛋白标准工作液。注意稀释时按照10倍梯度方法稀释,确保稀释准确。

3. 绘制标准曲线(酶标仪法):将蛋白标准工作液分别按0,1,2,4,8,12,16,20 μL加到96孔板中,然后用PBS或生理盐水依次加20,19,18,16,12,8,4,0 μL将上述梯度工作液补足到20 μL。得到蛋白浓度依次为0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲线。

4. 准备待测样品:将待测的蛋白样品进行适当稀释(可通过预实验检测,使样品蛋白浓度在标准曲线范围内,确保检测结果可信),按照每个样品20 μL的量加到96孔板中。待测样品与蛋白标准品用相同溶液稀释

5. 检测:向以上每孔加入200 μL考马斯亮蓝G250溶液充分混匀(可将96孔板放在振荡器上振荡30 s),室温放置3-5 min后,以标准曲线0号做参比,在595 nm波长下比色测定,记录各孔吸光度值。

6. 计算:以标准曲线中梯度蛋白含量(μg/mL)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应孔中待测样品的蛋白浓度(μg/mL),再乘以样品稀释倍数即为待测样品实际蛋白浓度。

另:如用分光光度计测定,则在第3步中将梯度标准品反应体积改为1 mL。向7支洁净的玻璃试管或比色管中分别加入0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL蛋白标准工作液(浓度0.5 mg/mL),然后各管中依次分别加入PBS或生理盐水1.0,0.95,0.9,0.8,0.6,0.4,0.2,0 mL,将梯度工作液补足至1 mL,每管充分混匀,即得到蛋白浓度依次为0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲线。

待测蛋白样品做适当稀释后,加入到新的玻璃试管或比色管中,样品量为1 mL。

向上述标准曲线梯度管及样品管中各加入考马斯亮蓝G250溶液3 mL,充分混匀,室温静置3-5 min后用分光光度计进行比色检测。

检测时分光光度计波长设置595 nm,以标准曲线0号管为参比调零,检测标准曲线及待测样品。按照步骤6中的方法绘制标准曲线及计算待测样品中的蛋白浓度。


注意事项

1. 考马斯亮蓝G250溶液使用前需恢复至室温,并颠倒混匀,以免影响检测的灵敏度。

2. 在进行蛋白标准贮备液的配制时,需确保溶解充分。稀释配制蛋白标准工作液时建议10倍梯度稀释,不要一次稀释50倍,以免产生较大误差。

3. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。


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