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产品详情
操作说明
注意事项
产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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支原体检测试剂盒（PCR法） |
FKU019 |
50T |
产品简介
支原体污染会对细胞各个方面都造成不良影响，已经成为细胞培养中高度重视的问题，因此，定期进行支原体污染检测是十分必要的。本支原体检测试剂盒是采用PCR方法，特异性的检测各种培养细胞生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）中支原体的污染。试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rRNA序列的保守区域设计的特异性引物，可直接使用细胞培养液作为PCR模板，特异性扩增支原体DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小时内即可完成，本试剂盒检测灵敏度高，可检测低至20个拷贝的支原体。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。
组成
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Component Number |
Component |
G1900-50T |
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G1900-1 |
Mycoplasma PCR Mix（2×） |
1 mL |
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G1900-2 |
Mycoplasma Primer Mix |
100 μL |
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G1900-3 |
Positive Control |
50 μL |
|
G1900-4 |
Mycoplasma Free Water |
1 mL |
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说明书 |
1份 | |
操作步骤
1. 样品准备：取适量待检细胞培养上清于洁净的PCR管中，利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板。血清样本可利用Mycoplasma Free Water稀释后，取适量样本于洁净的PCR管中，利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板；
2. PCR体系配制：每次实验需设置阴性对照（将1 μL待检样品换成等量的Mycoplasma Free Water）与阳性对照（在1 μL待检样品中加入0.5 μL Positive Control后一起作为Template），实验时戴一次性口罩与手套，谨慎操作，防止操作不当引入外源支原体污染；
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Component |
Volume |
|
Template |
1 μL |
|
Mycoplasma Primer Mix |
2 μL |
|
Mycoplasma PCR Mix（2×） |
10 μL |
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Mycoplasma Free Water |
To 20 μL |
3. PCR程序设置：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycles |
|
Initial Denaturation |
98℃ |
2 min |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
20 s |
30 |
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Annealing |
56℃ |
25 s |
|
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Extension |
72℃ |
10 s |
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Final extension |
72℃ |
5 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
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4. 凝胶电泳：取10 μL PCR产物，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测；
5. 结果分析：每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况，阳性条带大小500 bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是PCR体系中出现污染，建议重新实验确认结果。如有必要，也可对PCR产物进行常规测序，以确定具体的支原体种属。
注意事项
1. 本试剂盒可以检测M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis，M.pirum，Ureaplasma spp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少11种以上支原体污染。
2. 所有试剂在使用前于冰上彻底解冻、混匀，使用完毕后于-20℃保存。
3. 每次实验必须设置阴性对照、阳性对照，实验组建议设置样品模板梯度。
4. 操作时必须佩戴口罩，严格按照PCR操作标准，防止引入外源污染影响实验结果。
5. 为了确保细胞实验的可靠性及稳定性，建议定期进行支原体污染检测。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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