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您现在所在位置:主页 > 产品中心 > 蛋白质与免疫印迹 试剂 | 耗材 >>电泳制胶 >> SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
产品简介
本产品SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的所有试剂,用户只需准备少量纯水及制胶设备(制胶底座、玻璃板、梳子等),根据说明书操作即可制得所需凝胶。本试剂盒可制备常规大小凝胶至少50块。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输;4℃避光保存,有效期12个月。
使用方法
1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同,选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶,参照表格如下:
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围(kDa) (Tris-Glycine电泳缓冲液) |
最佳分离范围(kDa) (SWE快速高分辨电泳缓冲液) |
6% |
50-300 |
15-300 |
8% |
30-130 |
10-250 |
10% |
20-100 |
5-150 |
12% |
10-60 |
3-100 |
15% |
<40 |
<60 |
2. 根据目标蛋白分子量大小,选取分离胶的浓度,以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板(单块)为例,可参考下表配制制胶液:
分离胶浓度(%) | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% | ||||||||||
玻璃板厚度 | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm |
所需制胶液总体积*(mL) | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 |
H2O(mL) | 2.12 | 3.18 | 4.24 | 1.85 | 2.78 | 3.7 | 1.59 | 2.38 | 3.17 | 1.32 | 1.98 | 2.64 | 0.92 | 1.38 | 1.84 |
30% 丙烯酰胺(29:1)(mL) | 0.8 | 1.2 | 1.6 | 1.07 | 1.6 | 2.14 | 1.33 | 2.0 | 2.67 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
1.5 M Tris-HCl(pH 8.8)(mL) | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 |
10% SDS(μL) | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
10% AP(过硫酸铵)μL | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
TEMED(μL) | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
*制胶液总体积不包含TEMED的体积。
3. 浓缩胶配制可参考下表:
浓缩胶浓度(%) |
5% |
|||
H2O(mL) |
1.93 |
2.95 |
3.86 |
5.79 |
30% 丙烯酰胺(29:1)(mL) |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.5 |
1.0M Tris-HCl(pH 6.8)(mL) |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.5 |
10% SDS(μL) |
40 |
60 |
80 |
120 |
10% AP(过硫酸铵)(μL) |
30 |
45 |
60 |
90 |
TEMED(μL) |
4 |
6 |
8 |
12 |
总体积*(mL) |
3 |
4.5 |
6.0 |
9.0 |
*总体积不包含TEMED的体积。
4. 推荐电泳条件:
a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液进行电泳:200-250 V恒压,25-35 min可完成电泳;
b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液进行电泳:上层胶设置电压90 V,电泳约30 min(marker进入分离胶);下层胶调整电压为150-180 V,约60-90 min(可根据实际情况调整)。
注意事项
1. 所有试剂使用前需要提前复温至室温后方可使用。
2. AP(过硫酸铵)用纯水配制成10%浓度,即每支180 mg AP(过硫酸铵)管中加入1800 μL纯水溶解。配制成溶液的AP建议分装成小份后-20℃保存,有效期3个月;如放4℃保存,有效期1周。
3. 小于10 kDa的蛋白分离建议使用Tricine胶,丙烯酰胺凝胶可能不足以分离。
4. 温度对于胶的凝固时间会有影响,一般温度越低,凝固时间越长;温度越高凝胶越快。
5. 凝胶需要充分的凝固时间,建议胶制好充分静置确保凝胶彻底。
6. 当温度较低时,10%SDS溶液有结晶析出,于37℃复温融化后可继续使用。
7. 如需快速制胶试剂,可购买本公司其他产品,如SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒,或超快速彩色凝胶配制试剂盒系列,及高分辨超快速彩色凝胶配制试剂盒系列,可满足不同实验需求。
8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!
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