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RIPA裂解液(弱)

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价格 ¥0.00
货号:
S0921K50
产品规格:
100ml
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产品详情 操作说明 注意事项

产品简介

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation, IP)、免疫共沉淀(CO-IP)等实验。RIPA裂解液有很多配方,按其裂解效果主要分为强,中,弱三种。本裂解液为RIPA弱裂解液,其主要成分为:50 mM Tris-HCl (pH 7.4),150 mM NaCl,1 mM EDTA-2Na2,0.25% Sodium deoxycholate,和1% NP-40。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品,也可用于真菌或细菌样品。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;4℃避光保存,有效期12个月。


使用方法

自备蛋白酶抑制剂。RIPA裂解液(弱)在临用前需加入蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(弱)均指已添加蛋白酶抑制剂

对于组织样品:

1. 组织块用预冷PBS洗涤,去除血污,剪成细小碎块置于匀浆器中。

2. 加入10倍组织体积RIPA裂解液(弱)低温匀浆(推荐Servicebio自主研发生产的高速组织研磨仪KZ-III-FKZ-III-FP)。注意,RIPA裂解液(弱)的使用量可按照约每50 mg组织与1 mL裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低,可降低裂解液的用量,以提高粗提溶液中的蛋白浓度。

3. 将匀浆液转移至1.5 mL离心管中,振荡。冰浴30 min,期间每10 min用移液器反复吹打,确保组织细胞完全裂解。

4. 12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。

对于贴壁细胞样品:

1. 用PBS清洗细胞2-3次,最后一次彻底吸干残留液。

2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(弱)于细胞培养板、瓶内,反复晃动培养板、瓶,使裂解液与细胞充分接触3-5 min。

3. 用细胞刮刀将细胞刮下,收集到离心管中。

4. 12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。

对于悬浮细胞样品

1. 离心收集细胞。

2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例将细胞液与RIPA裂解液(弱)混合,振荡。

3. 冰浴30 min,期间每10 min用移液器反复吹打数次,确保细胞完全裂解。

4. 12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。

对于细菌或真菌样本:

1.取1 mL菌悬液,离心去上清,PBS洗涤一次,充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。

2.加入100-200 μL RIPA裂解液(弱),轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。

3.冰浴10 min,期间每2 min用移液器反复吹打数次,确保菌体完全裂解。

4.12000 g离心5 min,收集上清,即为总蛋白溶液。

注意事项

1. 组织或细胞裂解时可能会出现粘稠状。可用移液器反复吹打或涡旋仪振荡,直至呈液状为止。如果一直较稠,可再加入适量裂解液。

2. 本试剂不含有蛋白酶抑制剂,需自备蛋白酶抑制剂并在临用前加入。

3. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。


本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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