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产品详情
操作说明
注意事项
产品描述
本产品是一种适用于人外周血淋巴细胞分离的梯度密度分离液，也适用于大多数哺乳动物单个核细胞分离，其原理主要是根据外周血不同细胞之间的密度差异（红细胞和粒细胞密度大约为1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴细胞和单核细胞密度1.075-1.090 g/mL），通过梯度密度离心，将淋巴细胞从外周血中分离出来。本产品为无菌、低内毒素水平的即用型分离液，其密度为1.077±0.001 g/mL（20℃）。本产品在传统Ficoll-泛影葡胺基础上进行了优化，使其在血液样本加入后较长时间内维持分离液的稳定性，使用操作简单且分离的淋巴细胞纯度高、状态好。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输；2-8℃避光保存，有效期12个月。
操作步骤
以分离1 mL人外周血中的淋巴细胞为例，血液和淋巴细胞分离液体积比为1:1-1:2，在此范围内适当调整；选择离心管时需注意，血液和淋巴细胞分离液总体积不超过离心管容积的三分之二。
1. 取新鲜抗凝全血（肝素、EDTA、枸橼酸钠等抗凝剂皆可）1 mL，加入等体积PBS或者无钙镁Hanks缓冲液稀释，即得到2 mL稀释的全血；
2. 吸取人外周血淋巴细胞分离液3 mL加入到15 mL无菌离心管中；
3. 将离心管倾斜45°，将2 mL稀释后的血液沿管壁缓慢加入离心管中，使血液平铺在人外周血淋巴细胞分离液上层；
4. 建议使用水平转头离心机离心，将离心管置于水平转头适配器中，降低离心机加减速（3-5档为宜），室温条件下800 g离心25 min；
5. 离心后，轻拿离心管置于管架上，可观察到明显的分层现象：最上层是血浆层；中上白膜层是淋巴细胞层；中下层为淋巴细胞分离液层；最下层为红细胞和粒细胞层（参考附图）；
6. 吸除最上层血浆层，小心吸取白膜层（淋巴细胞层）到新的无菌离心管；
7. 用8 mL PBS或其他缓冲液洗涤后，100 g离心10 min，弃上清；
8. 重复步骤7（可选）
9. 根据实验目的用所需培养基或缓冲液重悬淋巴细胞。
注意事项
1. 本产品在使用前需室温充分平衡并颠倒混匀，分离时温度以18-25℃为宜。
2. 为保持淋巴细胞的活性，血液最好选取采血2 h以内的新鲜抗凝血液；如需对分离的淋巴细胞进行进一步的培养和检测，请在采血和分离过程中注意无菌操作。
3. 稀释或洗涤缓冲液，不可使用含钙、镁离子的缓冲液，以免导致血细胞凝聚。
4. 过多吸取淋巴细胞白膜层以外的成分，会导致交界处的一些粒细胞或血小板等被混入。
5. 由于不同血液样本间的差异，可能对分离效果产生影响。可根据实际情况适当调整离心力和时间，参考离心力和时间范围为：500-1000 g、20-30 min。
6. 将血液和淋巴细胞分离液混合一定时间后，出现红细胞沉降属于正常现象。
7. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。
附图：分离前后，各层示意图
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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