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人外周血淋巴细胞分离液

优惠价 275.00
价格 ¥0.00
货号:
FKU0149
产品规格:
100ml
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产品详情 操作说明 注意事项

产品描述

本产品是一种适用于人外周血淋巴细胞分离的梯度密度分离液,也适用于大多数哺乳动物单个核细胞分离,其原理主要是根据外周血不同细胞之间的密度差异(红细胞和粒细胞密度大约为1.090 g/mL;血小板密度1.030-1.035 g/mL;淋巴细胞和单核细胞密度1.075-1.090 g/mL),通过梯度密度离心,将淋巴细胞从外周血中分离出来。本产品为无菌、低内毒素水平的即用型分离液,其密度为1.077±0.001 g/mL(20℃)。本产品在传统Ficoll-泛影葡胺基础上进行了优化,使其在血液样本加入后较长时间内维持分离液的稳定性,使用操作简单且分离的淋巴细胞纯度高、状态好。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;2-8℃避光保存,有效期12个月。


操作步骤

以分离1 mL人外周血中的淋巴细胞为例,血液和淋巴细胞分离液体积比为1:1-1:2,在此范围内适当调整;选择离心管时需注意,血液和淋巴细胞分离液总体积不超过离心管容积的三分之二。

1. 取新鲜抗凝全血(肝素、EDTA、枸橼酸钠等抗凝剂皆可)1 mL,加入等体积PBS或者无钙镁Hanks缓冲液稀释,即得到2 mL稀释的全血;

2. 吸取人外周血淋巴细胞分离液3 mL加入到15 mL无菌离心管中;

3. 将离心管倾斜45°,将2 mL稀释后的血液沿管壁缓慢加入离心管中,使血液平铺在人外周血淋巴细胞分离液上层;

4. 建议使用水平转头离心机离心,将离心管置于水平转头适配器中,降低离心机加减速(3-5档为宜),室温条件下800 g离心25 min;

5. 离心后,轻拿离心管置于管架上,可观察到明显的分层现象:最上层是血浆层;中上白膜层是淋巴细胞层;中下层为淋巴细胞分离液层;最下层为红细胞和粒细胞层(参考附图);

6. 吸除最上层血浆层,小心吸取白膜层(淋巴细胞层)到新的无菌离心管;

7. 用8 mL PBS或其他缓冲液洗涤后,100 g离心10 min,弃上清;

8. 重复步骤7(可选)

9. 根据实验目的用所需培养基或缓冲液重悬淋巴细胞。



注意事项

1. 本产品在使用前需室温充分平衡并颠倒混匀,分离时温度以18-25℃为宜。

2. 为保持淋巴细胞的活性,血液最好选取采血2 h以内的新鲜抗凝血液;如需对分离的淋巴细胞进行进一步的培养和检测,请在采血和分离过程中注意无菌操作。

3. 稀释或洗涤缓冲液,不可使用含钙、镁离子的缓冲液,以免导致血细胞凝聚。

4. 过多吸取淋巴细胞白膜层以外的成分,会导致交界处的一些粒细胞或血小板等被混入。

5. 由于不同血液样本间的差异,可能对分离效果产生影响。可根据实际情况适当调整离心力和时间,参考离心力和时间范围为:500-1000 g、20-30 min。

6. 将血液和淋巴细胞分离液混合一定时间后,出现红细胞沉降属于正常现象。

7. 为了您的健康和安全,操作时请穿好实验服、戴好手套。



附图:分离前后,各层示意图


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本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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