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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀（immunol precipitation, IP）、免疫共沉淀（CO-IP）等实验。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分为强，中，弱三种。本裂解液为RIPA弱裂解液，其主要成分为：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na2，0.25% Sodium deoxycholate，和1% NP-40。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品，也可用于真菌或细菌样品。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期12个月。
使用方法
自备蛋白酶抑制剂。RIPA裂解液（弱）在临用前需加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(弱)均指已添加蛋白酶抑制剂。
对于组织样品：
1. 组织块用预冷PBS洗涤，去除血污，剪成细小碎块置于匀浆器中。
2. 加入10倍组织体积RIPA裂解液(弱)低温匀浆。注意，RIPA裂解液(弱)的使用量可按照约每50 mg组织与1 mL裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白浓度。
3. 将匀浆液转移至1.5 mL离心管中，振荡。冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打，确保组织细胞完全裂解。
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于贴壁细胞样品：
1. 用PBS清洗细胞2-3次，最后一次彻底吸干残留液。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(弱)于细胞培养板、瓶内，反复晃动培养板、瓶，使裂解液与细胞充分接触3-5 min。
3. 用细胞刮刀将细胞刮下，收集到离心管中。
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于悬浮细胞样品：
1. 离心收集细胞。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例将细胞液与RIPA裂解液(弱)混合，振荡。
3. 冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打数次，确保细胞完全裂解。
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于细菌或真菌样本：
1．取1 mL菌悬液，离心去上清，PBS洗涤一次，充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。
2．加入100-200 μL RIPA裂解液(弱)，轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。
3．冰浴10 min，期间每2 min用移液器反复吹打数次，确保菌体完全裂解。
4．12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
注意事项
1. 组织或细胞裂解时可能会出现粘稠状。可用移液器反复吹打或涡旋仪振荡，直至呈液状为止。如果一直较稠，可再加入适量裂解液。
2. 本试剂不含有蛋白酶抑制剂，需自备蛋白酶抑制剂并在临用前加入。
3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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