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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞或组织制备蛋白样品的裂解液。经本裂解液裂解组织或细胞得到的蛋白样本，可应用于PAGE，western blot，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)、ChIP（Chromatin Immunopre-cipitation）和ELISA等实验。
本产品主要成分为25 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA及1% NP-40。可适用于动物或植物组织及细胞样品，也可用于真菌或细菌样品。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期12个月。
使用方法
自备蛋白酶抑制剂。IP裂解液在临用前需加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的IP裂解液均指已添加蛋白酶抑制剂。
对于组织样品：
1. 组织块用预冷PBS洗涤，去除血污，剪成细小碎块置于匀浆器中。
2. 加入10倍组织体积IP裂解液低温匀浆。注意，IP裂解液的使用量可按照约每50 mg组织与1 mL裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白浓度。
3. 将匀浆液转移至1.5 mL离心管中，振荡。冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打，确保组织细胞完全裂解；
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于贴壁细胞样品：
1. 用PBS清洗细胞2-3次，最后一次彻底吸干残留液。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例吸取IP裂解液于细胞培养板、瓶内，反复晃动培养板、瓶，使裂解液与细胞充分接触3-5 min。
3. 用细胞刮刀将细胞刮下，收集到离心管中。
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于悬浮细胞样品：
1. 离心收集细胞。
2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例将细胞液与IP裂解液混合，振荡。
3. 冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打数次，确保细胞完全裂解。
4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
对于细菌或真菌样本：
1．取1 mL菌悬液，离心去上清，PBS洗涤一次，充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。
2．加入100-200 μL IP裂解液，轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。
3．冰浴10 min，期间每2 min用移液器反复吹打数次，确保菌体完全裂解。
4．12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。
注意事项
1. 组织或细胞裂解时可能会出现粘稠状。可用移液器反复吹打或涡旋仪振荡，直至呈液状为止。如果一直较稠，可再加入适量裂解液。
2. 本试剂不含有蛋白酶抑制剂，需自备蛋白酶抑制剂并在临用前加入。
3. 本产品裂解得到的总蛋白溶液可兼容本公司的BCA蛋白定量检测试剂盒。
4. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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