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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
本产品Recombinant TEV Protease是在大肠杆菌中重组表达带His标签(His-tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一种常用的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S)，并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸残基之间进行酶切。Recombinant TEV Protease最适酶切温度为30℃，在29-34℃范围均有较高的酶活性，但当温度达到或高于37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白结构和生物活性，建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有较高活力，因此对于使用鎳柱纯化含有His标签目的蛋白，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的纯化的目的蛋白溶液中，在4℃透析去除咪唑同时进行酶切，也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切后目的蛋白溶液中带有His标签的TEV Protease以及切除的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。
应用：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他标签蛋白。Recombinant TEV Protease本身带有His标签可以与镍柱结合。
来源：烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)半胱氨酸蛋白酶，大肠杆菌重组表达，含His标签。
酶活定义：在30℃，pH 8.0条件下，1 h内可以将3 μg底物（含有Recombinant TEV Protease酶切位点的蛋白）切割85%以上所需酶量为一个酶活单位。
失活或抑制：常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不会抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Protease的酶活力。在较高浓度咪唑中TEV Protease仍保持较高酶活性。
纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%，10 U/μL。
Recombinant TEV protease储存液：50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，50% (v/v) Glycerol，pH 8.0。
10×TEV Buffer：500 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，5 mM EDTA，10 mM DTT，pH 8.0。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。
操作步骤
1. 蛋白酶切体系推荐：
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Component |
Volume |
|
10×TEV Buffer |
5 μL |
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目的蛋白 |
30 μg |
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Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL) |
1 μL |
|
ddH2O |
To 50 μL |
2. 将上述反应体系置于30℃反应1-4 h。如果目的蛋白在30℃稳定性不佳，可考虑将反应体系置于4℃过夜酶切（约16 h左右）；
3. 取酶切产物10 μL样品进行SDS-PAGE电泳检测，可以评估酶切用量和反应条件。
注意事项
1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
酶切应用实例
图1：Recombinant TEV Protease酶切对照底物蛋白（A+B融合蛋白，其中含有Recombinant TEV Protease酶切位点）效果图（酶切条件30℃、pH 8.0，分别酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h，依次对应泳道Lane：1-6，酶切体系中加入底物与酶质量比为20：1）。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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