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Recombinant TEV Protease (His-tag)

优惠价 1125.00
价格 ¥0.00
货号:
S0921K127
产品规格:
5000 U
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产品详情 操作说明 注意事项

产品简介

本产品Recombinant TEV Protease是在大肠杆菌中重组表达带His标签(His-tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一种常用的半胱氨酸蛋白酶,能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S),并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸残基之间进行酶切。Recombinant TEV Protease最适酶切温度为30℃,在29-34℃范围均有较高的酶活性,但当温度达到或高于37℃时,其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中,为尽量保留目的蛋白结构和生物活性,建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范围内具有活性,而当pH小于或等于5时,会失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有较高活力,因此对于使用鎳柱纯化含有His标签目的蛋白,可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的纯化的目的蛋白溶液中,在4℃透析去除咪唑同时进行酶切,也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切后目的蛋白溶液中带有His标签的TEV Protease以及切除的His标签,都可以通过与镍柱结合而去除。

应用:常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他标签蛋白。Recombinant TEV Protease本身带有His标签可以与镍柱结合。

来源:烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶,大肠杆菌重组表达,含His标签。

酶活定义:在30℃,pH 8.0条件下,1 h内可以将3 μg底物(含有Recombinant TEV Protease酶切位点的蛋白)切割85%以上所需酶量为一个酶活单位。

失活或抑制:常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不会抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等,可以显著抑制TEV Protease的酶活力。在较高浓度咪唑中TEV Protease仍保持较高酶活性。

纯度及浓度:SDS-PAGE检测纯度≥95%,10 U/μL。

Recombinant TEV protease储存液:50 mM Tris-HCl,250 mM NaCl,1 mM EDTA,5 mM DTT,50% (v/v) Glycerol,pH 8.0。

10×TEV Buffer:500 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,5 mM EDTA,10 mM DTT,pH 8.0。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;-20℃保存,有效期12个月。


操作步骤

1. 蛋白酶切体系推荐:

Component

Volume

10×TEV Buffer

5 μL

目的蛋白

30 μg

Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL)

1 μL

ddH2O

To 50 μL

2. 将上述反应体系置于30℃反应1-4 h。如果目的蛋白在30℃稳定性不佳,可考虑将反应体系置于4℃过夜酶切(约16 h左右);

3. 取酶切产物10 μL样品进行SDS-PAGE电泳检测,可以评估酶切用量和反应条件。


注意事项

1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴,使用完毕后应立即放置于-20℃保存,建议分装保存;

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


酶切应用实例


图片1.png

 


图1:Recombinant TEV Protease酶切对照底物蛋白(A+B融合蛋白,其中含有Recombinant TEV Protease酶切位点)效果图(酶切条件30℃、pH 8.0,分别酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h,依次对应泳道Lane:1-6,酶切体系中加入底物与酶质量比为20:1)。

 

产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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