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T7 High Yield Transcription Kit

优惠价 1875.00
价格 ¥0.00
货号:
M0k942118
产品规格:
50T
购买数量:
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产品详情 操作说明 注意事项

产品信息

产品名称

产品编号

规格

T7 High Yield

Transcription Kit

M0k942118

50T

产品简介

本试剂盒是利用T7 RNA Polymerase,以含有T7启动子的线性化质粒DNA、PCR产物或合成的DNA为模板,以NTP为底物,在体外转录合成RNA。本试剂盒优化了RNA体外转录反应体系,可以简单快速获得大量的RNA分子,如果转录时在底物中加入修饰的核苷酸,可以制备生物素或染料标记的RNA。本试剂盒主要用于体外翻译、RNase保护实验、杂交探针标记、RNA剪切等生物实验。在反应体系中1 μg的模板投入量可以产生大于100 μg的RNA,适用于制备长度100-5000 nt的RNA。


图片1.png

 


图1 T7 RNA polymerase转录原理图


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;-20℃保存,12个月有效。


组成

Component Number

Component

G3021-50T

G3021-1

T7 RNA Transcription Enzyme Mix

200 μL

G3021-2

5×T7 Transcription Reaction Buffer

250 μL

G3021-3

25 mM NTP Mix

100 μL

G3021-4

DNase I

50 μL

G3021-5

Nuclease Free Water

1 mL

G3021-6

Control Template (0.5 μg/μL)

10 μL

说明书

1份


操作步骤

1. 模板准备:

a. 以T7启动子的质粒为模板:为了得到特定长度的RNA,质粒模板必须完全线性化(需要纯化后作为模板),且线性化的质粒确保双链为平末端或5’突出端(避免出现3’突出端),每个反应建议模板量为1 μg;

b. 以T7启动子的PCR产物或合成的DNA片段为模板:PCR扩增模板时将T7启动子(5’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’)加到非编码链引物的5‘端。PCR产物可以不经纯化直接作为转录模板,但纯化后会产出更多的RNA,每个反应建议模板量为0.5 μg左右。

2. 转录反应:按照表格推荐反应体系在洁净的EP管中加入各种试剂,充分混匀后于37℃反应2 h。(如合成小于300 nt的RNA,建议将反应时间延长至4 h或更长时间)。

Component

Volume

Template

0.5-1 μg

5×T7 Transcription Reaction Buffer

4 μL

25 mM NTP Mix

2 μL

T7 RNA Transcription Enzyme Mix

4 μL

Nuclease Free Water

To 20 μL

3. 反应完毕后向体系中加入1 μL DNase I,37℃反应15 min,消化转录的DNA模板。

4. 转录合成的RNA经电泳分析、纯化后,可用于下游实验。

5. 转录产物定量、检测:通过紫外吸收法可以测定RNA浓度(游离核苷酸会影响定量的准确性,RNA产物需要纯化);电泳检测推荐采用1%甲醛琼脂糖变性胶检测,电泳液为1×MOPS Buffer(10×MOPS Buffer:0.4 M MOPS,pH 7.0,0.1 M Sodium Acetate,10 mM EDTA)。凝胶制备方法:称取0.5 g琼脂糖加入36 mL RNase-Free Water中,加热溶化后,加入5 mL 10×MOPS Buffer。待溶液冷却至不烫手时,加入9 mL甲醛溶液(37%),混匀后倒胶。电泳检测时取适量RNA与RNA Loading Buffer混合,70℃孵育10 min后冰浴2 min,全部点样。电泳结束后用EB或SerRed(G3606)染色观察。


注意事项

1. 人体皮肤表面含有丰富的RNase,实验时请带好实验手套、口罩,实验耗材无菌无酶,防止RNase污染。

2. 如需制备标记RNA,请替换试剂盒中的NTP Mix。

3. 试剂盒中对照模板转录长度为500 nt。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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