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产品简介
本试剂盒为高灵敏度的两步法免疫组化试剂盒,适用于一抗来源为小鼠的抗体的后续显色。试剂盒中包含辣根过氧化物酶HRP偶联标记的山羊抗小鼠IgG,本产品适用于小鼠来源的一抗,在IHC、Western blot实验中,HRP标记的山羊抗小鼠二抗与小鼠来源一抗(先与抗原反应)结合后,再与DAB反应。DAB是辣根过氧化物酶(HRP)的底物,在HRP的催化下,DAB产生棕色沉淀,实现信号放大和显色。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输;二抗-20℃保存,DAB稀释液和50×DAB原液4℃保存;有效期12个月。
准备工作
1. 自备PBS、细胞核复染试剂(推荐苏木素染液G1004、苏木素分化液G1039、苏木素返蓝液G1040)、梯度酒精、二甲苯、封片剂等。
2. 配制二抗工作液:将HRP标记山羊抗小鼠二抗用PBST(pH 7.2-7.4)以1:200比例稀释,得到二抗工作液。现配现用,48 h内使用。
3. 配制DAB显色工作液:每1 mL DAB稀释液中加入20 μL 50×DAB原液,混匀备用。按需配制,现配现用。
操作步骤
1. 按照常规免疫组化步骤,组织切片经前期脱蜡、抗原修复、封闭、一抗孵育后,经PBS洗三次,每次5 min。
2. 二抗孵育:每张切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆盖组织,室温孵育30-60 min。经PBS洗三次,每次 5min。
3. DAB显色:每张切片上滴加50-100 μL DAB工作液,室温孵育数分钟,通过显微镜下观察控制显色至预期效果,然后立即水洗终止显色。
4. (可选)细胞核复染:切片经苏木素染液染色3-5 min,自来水洗;经苏木素分化液快速分化3-5 s,自来水洗;自来水冲洗返蓝或经苏木素返蓝液返蓝3-5 s。
5. 封片:切片按常规步骤经梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
注意事项
1. 如果免疫组化显色时出现背景过深,考虑延长洗涤时间,使用适当的封闭液进行封闭,灭活内源性过氧化氢酶,缩短显色时间,降低二抗浓度等。如果没有显色或显色太浅,可适当提高一抗、二抗浓度,延长显色时间,其次检测二抗是否被正常显色。
2. DAB人体有害,操作时请小心,做好防护避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!
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