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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
本试剂盒为高灵敏度的两步法免疫组化试剂盒，适用于一抗来源为兔的抗体的后续显色。试剂盒中包含辣根过氧化物酶HRP偶联标记的山羊抗兔IgG，本产品适用于兔来源的一抗，在IHC、Western blot实验中，HRP标记的山羊抗兔二抗与兔来源一抗（先与抗原反应）结合后，再与DAB反应。DAB是辣根过氧化物酶（HRP）的底物，在HRP的催化下，DAB产生棕色沉淀，实现信号放大和显色。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；二抗-20℃保存，DAB稀释液和50×DAB原液4℃保存；有效期12个月。
准备工作
1. 自备PBS。细胞核复染试剂。梯度酒精、二甲苯、封片剂等。
2. 配制二抗工作液：将HRP标记山羊抗兔二抗用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀释，得到二抗工作液。现配现用，48 h内使用。
3. 配制DAB显色工作液：每1 mL DAB稀释液中加入20 μL 50×DAB原液，混匀备用。按需配制，现配现用。
操作步骤
1. 按照常规免疫组化步骤，组织切片经前期脱蜡、抗原修复、封闭、一抗孵育后，经PBS洗三次，每次5 min。
2. 二抗孵育：每张切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆盖组织，室温孵育30-60 min。经PBS洗三次，每次 5min。
3. DAB显色：每张切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室温孵育数分钟，通过显微镜下观察控制显色至预期效果，然后立即水洗终止显色。
4. （可选）细胞核复染：切片经苏木素染液染色3-5 min，自来水洗；经苏木素分化液快速分化3-5 s，自来水洗；自来水冲洗返蓝或经苏木素返蓝液返蓝3-5 s。
5. 封片：切片按常规步骤经梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
注意事项
1. 如果免疫组化显色时出现背景过深，考虑延长洗涤时间，使用适当的封闭液进行封闭，灭活内源性过氧化氢酶，缩短显色时间，降低二抗浓度等。如果没有显色或显色太浅，可适当提高一抗、二抗浓度，延长显色时间，其次检测二抗是否被正常显色。
2. DAB人体有害，操作时请小心，做好防护避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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