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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS的检测通常因其最终产物而定。超氧阴离子是活性氧的一种，属于一种含氧自由基，能将NBT（氮蓝四唑）还原成不溶于水的蓝色甲瓒化合物，从而定位组织中的超氧阴离子。根据基本原理也称其为NBT法。本产品就是基于以上原理，用于植物活组织中的超氧阴离子染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有超氧阴离子聚集的部位呈蓝色至深蓝色。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期12个月。
组成
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Component |
G1023-100ML |
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NBT |
50 mg |
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Tris缓冲液（pH 7.4） |
100 mL |
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NBT样本保存液 |
2×100 mL |
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说明书 |
1份 |
使用方法
1. 试剂准备：将50 mg NBT以Tris缓冲液(pH 7.4) 100 mL充分溶解，得到NBT染色工作液，避光4℃保存，一周内有效。
2. 采集植物幼苗或根尖，纯水稍洗净，滤纸上吸干多余水分。将植物幼苗或根尖浸入NBT染色工作液中，常温避光浸染2-6 h，至阳性部位出现深蓝色，其余部位为淡蓝色或近无色或呈植物本身的颜色即可（根据植物幼嫩程度。显色程度调整染色时间）。
3. 用镊子将植物幼苗或者叶片小心取出，纯水漂洗3-5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3-16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素或者淡蓝色背景，处理期间可多次更换新鲜的95%乙醇。
4. 用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入纯水中来回漂洗3-5次，置于滤纸上吸干多余水分后，将样本转入适量NBT样本保存液中浸泡30 min后，随后可取出拍照。样本可置于该溶液中常温保存一周。
注意事项
1. NBT染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周内使用。存放时间过久，会影响显色。
2. 因任何外在因素都可能刺激植物应激产生超氧阴离子，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。
3. 样本染色完成后尽快拍照保存结果。
4. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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