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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
HE染色，即苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。苏木素染液为碱性，主要使细胞核内的染色质、胞质内的核酸着蓝色至蓝紫色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色可用于观察比较正常组织与病变组织的形态结构，可初步确定或鉴别病变组织、细胞中出现的异常物质。经本产品HE染液染色的组织或细胞，细胞核呈蓝色至蓝紫色，细胞浆呈红色，胞浆与胞核对比鲜明。
储存与运输
常温保存与运输。有效期18个月。
实验前准备
自备苏木素分化液、苏木素返蓝液、二甲苯、梯度乙醇、无水乙醇、中性树胶等。
操作步骤
1. 样本前处理
(1) 对于石蜡切片：切片依次经二甲苯脱蜡10 min，更换新鲜的二甲苯脱蜡10 min，无水乙醇 5min，新鲜无水乙醇5 min，90%乙醇5 min，75%乙醇5 min，自来水洗。
(2) 对于冰冻切片：-20℃保存的冰冻切片需静置5-10 min恢复至室温。如需固定，则经所需固定液室温后自来水洗。
2. HE染色
(1) 苏木素染色：上述处理好的切片，进入苏木素染液染色3-5 min，自来水洗；
(2) 分化：切片经苏木素分化液2-5 s，自来水流水充分冲洗；
(3) 返蓝：苏木素返蓝液返蓝2-5 s，自来水流水充分冲洗；
(4) 伊红染色：切片依次经85%、95%梯度乙醇脱水，各5 min。然后进入伊红染液(醇溶)中染色5 min，经两次无水乙醇脱水各5 min；
(5) 透明：切片再经新鲜无水乙醇脱水5 min，二甲苯透明5 min，更换新鲜的二甲苯再透明5 min。
(6) 封片：滴加中性树胶进行封片。
注意事项
1. 染色后用特定溶液将组织中过多结合的染液脱去，这个过程称为分化作用，所用溶液称为分化液。在HE染色种常用低浓度盐酸作为分化液，因为酸能破坏苏木素的醌型结构结构，使色素与组织分离而褪色。组织在经苏木素染色后，必须经过分化去除组织中过多结合及非特异性吸附的染料，才能进行伊红染色，确保细胞核与胞浆显色分明。可使用苏木素分化液。分化过程中，根据组织切片厚度、组织类型等结合镜下观察适当调整分化时间。
2. HE染色中苏木素染色后的返蓝很重要。苏木素在酸性条件下为离子状态，呈红色；在碱性条件下呈蓝色。组织切片经酸性分化液分化后呈红色或粉红色，需立即水洗终止分化，再用弱碱性溶液使苏木素，这个过程就是返蓝作用。如果没有专用的返蓝液，用温水浸洗也能使细胞核返蓝，只是所需时间略长。推荐苏木素返蓝液。
3. 苏木素及伊红染色程度可以根据染色需要进行调整染色时间。
4. 苏木素染液可重复使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分挥发。当组织或细胞着色明显偏浅或颜色异常时请更换新的染液。
5. 用于染色后脱水的无水乙醇纯度需大于99.9%。如果乙醇含水，伊红会褪色导致染色不均匀。
6. 伊红染液(醇溶)可反复使用数次，当组织着色明显偏浅时建议更换新的染液。
7. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。
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