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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
本产品RNA提取液是一种用于细胞或组织总RNA提取的试剂，利用异硫氰酸胍等物质迅速裂解细胞，使RNA释放并萃取至苯酚中，同时内含RNase抑制剂，防止RNA降解，保持RNA的完整性。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期12个月。
组成
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Component |
数量 |
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RNA提取液 |
100 mL |
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说明书 |
1份 |
使用说明
自备LF、异丙醇、DEPC水、75%乙醇（DEPC水配制）。
1. 细胞或组织样本裂解
贴壁细胞：去除细胞培养液，用适量预冷PBS清洗细胞，尽量将PBS吸除干净。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，轻轻晃动使板底细胞充分接触RNA提取液，移液枪吹打细胞，使细胞裂解，然后转移至离心管中，室温静置5 min。
悬浮细胞：离心收集细胞，尽量将上清液吸除干净，每1-10×106个细胞加入1 mLRNA提取液，移液枪吹打数次使细胞裂解，室温静置5 min。
组织样本：组织剪切成小块，放入预冷的匀浆器内，每100 mg组织加入1 mL RNA提取液，匀浆至无可见组织块。4℃，12000 g离心10 min使组织碎片分离，转移上清至新的离心管中。
2. RNA抽提：每1 mL RNA提取液加380 μLLF，涡旋混匀或离心管上下颠倒剧烈晃动15 s，室温静置3 min。
3. 离心：4℃，12000 g离心15 min，小心转移上层无色水相至新的离心管中，每毫升提取液大约可吸取500-550 μL。
4. 沉淀RNA：向上述收集的水相提取物管中加入550 μL异丙醇，轻轻颠倒混匀数次，-20℃沉淀15 min。
5. 离心：4℃，12000 g离心10 min，在管底可见白色沉淀即为总RNA，弃上清。
6. 洗涤：加入1 mL 75%乙醇，颠倒混匀。4℃，12000 g离心5 min，弃上清，再高速短暂离心（5000 g离心3-5 s），用微量吸头小心吸尽液体。
7. RNA溶解：将有RNA沉淀的离心管开口静置3-5 min，待RNA略晾干后，加入20 μL DEPC水使RNA充分溶解，即可用于浓度检测及后续实验，不能及时进行后续实验时需将RNA置于-70℃保存。注意不可让RNA过分干燥，否则很难溶解，且会影响A260/280比值。
注意事项
1. 所有枪头和离心管均需无RNA酶污染，可购买本公司无菌无酶耗材。
2. 本试剂含异硫氰酸胍和重蒸酚，避免接触皮肤或吸入。
3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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