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产品详情
操作说明
注意事项
产品简介
本产品MTT检测试剂盒，广泛应用于细胞增殖和活性测定，以及药物对细胞毒性的检测。MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)溶解细胞中的甲臜沉积物，用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，甲臜形成的量与活细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，活细胞数越多，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。使用本试剂盒检测细胞活性时，在进行反应后需吸除上清，因此不能用于悬浮细胞的检测。如需检测悬浮细胞，建议使用本公司其他产品。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期3个月；或-20℃避光保存，有效期6个月，避免反复冻融。
操作步骤
1. 贴壁细胞处理：待细胞贴壁后，按照实验设计进行加药、转染等处理；
2. 细胞活性检测：每孔加入20 μL MTT工作液，在细胞培养箱内孵育4 h；
3. 去除上清：完成孵育后，会发现孔板底部出现少量紫色结晶，可在40倍显微镜下观察。用移液枪小心吸除孔板内上清溶液（切勿吸到底部紫色结晶）；
4. 显色：向孔板中加入100 μL DMSO，37℃孵育15 min左右（可用手指轻微敲击板底小幅度震荡），待紫色结晶全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些；如果紫色结晶较大较多，可适当延长溶解时间；
5. 检测：在波长490 nm或570 nm处测定吸光度。如无570 nm滤光片，可使用560-600 nm滤光片。
注意事项
1. DMSO在较低温度时会凝固，可于37℃复溶后不影响使用。
2. 本试剂盒检测原理是依赖于脱氢酶催化的反应，样品中如有较多还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，需设法去除。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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