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产品详情
操作说明
注意事项
产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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通用型DNA纯化回收试剂盒 |
M0k942131 |
100T |
产品简介
本试剂盒采用独特的吸附柱，既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，又能用于直接纯化PCR产物，满足多种实验需要。Buffer GL中含有pH指示剂，可根据颜色来判断溶胶或PCR产物回收是否达到最佳状态。使用本产品可回收100 bp-10 kb大小的DNA片段，回收率可达85%。每个吸附柱每次可吸附的DNA量为20 μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
储存与运输
常温运输；常温干燥处保存，有效期12个月。
组成
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Component Number |
Component |
G3631-100T |
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G3631-1 |
Buffer BL |
50 mL |
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G3631-2 |
Buffer GL (Yellow) |
60 mL |
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G3631-3 |
Buffer PW |
2×15 mL |
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G3631-4 |
Elution Buffer |
15 mL |
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G3631-5 |
Bind DNA Mini Columns |
100个 |
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G3631-6 |
Collection Tubes |
100个 |
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说明书 |
1份 | |
实验步骤
一、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
1. （可选步骤）柱平衡：将吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，然后在吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g离心1 min，去除收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中(请使用当天处理过的柱子)；
2. 用干净刀片将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量；
3. 向胶块中加入等倍体积溶液Buffer GL（如凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 µL，则加入100 µL溶液Buffer GL，60℃水浴至胶块完全溶解（其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解，若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）（注意：若是对于回收产量要求高，可在加入Buffer GL完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。凝胶完全融解后应呈现淡黄色，即可进行后续操作。如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色或红色，请使用10 µL 3M乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为淡黄色后再进行后续操作）；
4. 将上一步所得溶液全部转入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g离心1 min，弃去收集管中废液，将吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容积为800 μL，若样品体积大于800 μL可分批加入）；
5. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），10,000 g离心1 min，弃去收集管中废液，将吸附柱放入收集管中（注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer PW加入后静置2-5 min再离心）；
6. 重复操作步骤5；
7. 将吸附柱放入收集管中，10,000 g离心2 min，尽量除去残留液体。将吸附柱置于室温放置5 min，彻底晾干（注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、PCR等实验）；
8. 将吸附柱放入一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃预热效果更好），室温放置2 min，然后10,000 g离心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脱液的体积不应少于30 μL，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，10,000 g离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中）。
二、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA片段
1. （可选步骤）柱平衡：将吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，然后在吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g离心1 min，去除收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中(请使用当天处理过的柱子)；
2. 预估PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入3倍体积的溶液Buffer GL（加入Buffer GL不少于150 μL），充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）（注意：若是对于回收产量要求高，可在加入Buffer GL后再加入3/4 PCR反应液或酶切反应液的体积的异丙醇以提高回收率；混合后溶液应呈现淡黄色，即可进行后续操作。如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色或红色，请使用10 µL 3M乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为淡黄色后再进行后续操作）；
3. 将上一步所得溶液全部转入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g离心1 min，弃去收集管中废液，将吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容积为800 μL，若样品体积大于800 μL可分批加入）；
4. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），10,000 g离心1 min，弃去收集管中废液，将吸附柱放入收集管中（注意：如回收DNA是用于盐敏感实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议Buffer PW加入后静置2-5 min再离心）；
5. 重复操作步骤4；
6. 将吸附柱放入收集管中，10,000 g离心2 min，尽量除去残留液体。将吸附柱置于室温放置5 min，彻底晾干（注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、PCR等实验）；
7. 将吸附柱放入一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃预热效果更好），室温放置2 min，然后10,000 g离心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脱液的体积不应少于30 μL，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，10,000 g离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中）。
注意事项
1. 溶液Buffer BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响，柱平衡步骤也可省略。
2. 使用前请先检查Buffer PW是否加入指定量的无水乙醇。
3. 各溶液使用后请及时将盖子拧紧。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
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